当前位置: 蛇莓 >> 蛇莓成分 >> 草莓种植技术三种鉴定无病毒草莓苗方法
一、抗血清检测法
植物病毒是由蛋白质和核酸组成的核蛋白,因而是一种较好的抗原,给动物注射后会产生抗体,抗体存在于血清之中称为抗血清。不同病毒产生的抗血清有各自的特异性。用已知抗血清可以鉴定未知病毒的种类。这种抗血清就是高度专一性的试剂,这种方法特异性高,测定速度快,一般几小时甚至几分钟就可以完成。所以抗血清法成为植物病毒鉴定中最有用的方法之一。
抗血清鉴定法要进行抗原的制备(包括病毒的繁殖,病叶研磨和粗汁液澄清等),抗血清的采收,分离等。血清可分装到小玻璃瓶中,贮存在-15~-25℃的冰冻条件下。测定时,把稀释的抗血清与未知的病毒植物在小试管内混合,这一反应导致形成可见的沉淀。然后根据沉淀反应来鉴定病毒。
二、分子生物学检测法
在草莓的病毒检测中,传统的方法是采用指示植物法进行生物学检测。这对确定病毒的侵染性和检测病毒的实用性,都有重要意义。但是,这种方法总共需要较长时间,有时还需反复验证,特别是在检测环境条件不能保证时,很容易造成检测结果不准确,近年建立并应用了血清学检测方法以后,缩短了检测时间,也保证了检测的准确性,但是仍存在着有些病毒的抗血清难以制备,病毒含量低时难以检测,以及植株体内常存在着某些干扰物质影响检测准确性等缺点。特别是对那些没有外壳蛋白的病原核糖核酸,如类病毒,无法用血清学方法进行检测。
近年在很多植物的病毒检测中,研究并开始应用了分子生物学检测方法,在检测病毒的灵敏度、特异性反应及检测速度等方面,都克服了血清学方法的很多不足,逐步形成了一条新的检测途径。现在有三种分子生物学方法检测草莓病毒。
1、双链RNA法。草莓在受RNA病毒侵染的植物体内,有相应复制形式的双链RNA存在,而在健康植株中未发现病毒的dsRNA。
2、核酸分子杂交检测法。用互补DNA检测草莓单链RNA病毒的方法,又称DNA分子杂交法。
3、聚合酶链反应(PCR)检测法。一种体外快速扩增病毒核酸序列并加以检测的技术。
三、电镜检测法
借助电子显微镜能分辨0.5微米大小的病毒颗粒。这样可以直接观察病毒,检查出有无病毒存在,了解病毒颗粒的大小、形状和结构,又可以鉴定病毒的种类。这是一种较为先进的方法,但需一定的设备和技术。
由于电子的穿透力很低,制品必须薄到10~微米,通常制成厚20微米左右的薄片,置于铜载网上,才能在电子显微镜下观察到。
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